隨著社會(huì)、經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，氮元素通過(guò)各種途徑進(jìn)人水體，成為水體主要污染元素
         ［１］。水體中氮含量過(guò)高會(huì)導(dǎo)致水體富營(yíng)養(yǎng)化
         ［２］，破壞水生態(tài)系統(tǒng)。水體脫氮方法主要有物理、化學(xué)和生物方法。生物脫氮因其具有高效、經(jīng)濟(jì)和無(wú)二次污染等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用廣泛
         ［３］。目前，生物脫氮研究的熱點(diǎn)主要是異養(yǎng)硝化－好氧反硝化脫氮。該法相比傳統(tǒng)生物脫氮具有以下優(yōu)勢(shì)：
              １）在好氧條件下能同時(shí)進(jìn)行硝化和反硝化作用
         ［５］，提高了經(jīng)濟(jì)效益；２）硝化作用消耗的堿度可由反硝化作用產(chǎn)生的０Ｈ補(bǔ)償，維持系統(tǒng)ｐＨ穩(wěn)定
         ［６］；３）能直接利用水體中的有機(jī)碳作為脫氮所需碳源，脫氮同時(shí)降低ｃ〇Ｄ［７］等。正是由于這些優(yōu)勢(shì)，異養(yǎng)硝化－好氧反硝化菌具有具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究利用溴百里酚培養(yǎng)基從環(huán)境中初篩出７株好氧反硝化菌，然后以Ｎ０３－Ｎ為唯一氮源進(jìn)行復(fù)篩，從中優(yōu)選出一株異養(yǎng)硝化＿好氧反硝菌株Ｆ２，通過(guò)１６ｓＲＮＡ分子鑒定法對(duì)Ｆ２進(jìn)行種屬鑒定。再分別以Ｎ０３－Ｎ、Ｎ０２－Ｎ、ＮＨ：－Ｎ為唯一氮源培養(yǎng)菌株Ｆ２，考察菌株Ｆ２在不同好氧反硝化體系中對(duì)氮源的降解效率。基于硝化－反硝化的主要發(fā)生場(chǎng)所，各菌種分別取自廣州市瀝滘污水處理廠曝氣池活性污泥、廣州市東山湖湖底沉積物、深圳市坪山垃圾填埋場(chǎng)垃圾滲濾液。取３個(gè)２５０ｍＬ錐形瓶，每個(gè)瓶中加人１００ｍＬ富集培養(yǎng)基及若干玻璃珠，滅菌，再分別向每個(gè)瓶中移人５ｍＬ沉積物、活性污泥、滲濾液。置于３０°Ｃ，１５０ｒ／ｍｍ的恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)５ｄ，每隔２４ｈ向富集培養(yǎng)液中加人１ｍＬ５％ＮａＮ０３溶液和１ｍＬ５％（ＮＨ４）２Ｓ０４溶液，做３個(gè)平行樣。培養(yǎng)完成后，將富集培養(yǎng)液在無(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行梯度稀釋。選擇合適稀釋倍數(shù)（１０５、１〇６、１〇７）的菌懸液，取１ｍＬ均勻涂布于ＢＴＢ培養(yǎng)基上，置于３０°Ｃ的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１￣２ｄ，每個(gè)梯度做三組平行樣。將周圍長(zhǎng)有藍(lán)色暈圈或變藍(lán)的菌落挑出在ＬＢ固體培養(yǎng)基上劃線，將劃線后的培養(yǎng)基放人３０°Ｃ的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１￣２ｄ，對(duì)長(zhǎng)出的菌落再次進(jìn)行平板劃線，重復(fù)平板劃線多次以得到純菌。將分離得到的純菌株接種到ＬＢ斜面培養(yǎng)基，４°Ｃ保存。將菌株革蘭氏染色，置于光學(xué)顯微鏡下觀察，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。具體步驟如下：１）在經(jīng)酒精消毒的載玻片上滴加一滴蒸餾水，用接種環(huán)挑取適量菌苔均勻涂布于水滴中；２）將載玻片置于酒精燈上方烘干，通過(guò)火焰２￣３次，使細(xì)菌固定于載玻片上；３）向載玻片上的細(xì)菌固定處滴加結(jié)晶紫溶液進(jìn)行初染，靜置約１分鐘，用蒸餾水洗凈；４）滴加碘液進(jìn)行煤染，并靜置約１ｍｍ，水洗后并用濾紙吸干；５）使用９５％的酒精進(jìn)行流滴脫色，時(shí)間大約為２０￣３０ｓ，接著立即用水沖凈；６）最后使用蕃紅溶液進(jìn)行復(fù)染３￣５ｍｍ，之后用水沖凈，待載玻片干燥；７）使用油鏡進(jìn)行鏡檢。