鹽酸莫西沙星為第四代新型喹諾酮類抗菌藥物，具 有廣譜抗菌活性，抗菌的作用機制為抑制拓撲異構酶Ⅱ 和拓撲異構酶Ⅳ，阻斷細菌 DNA 合成，主要優勢是耐 藥性極低，為 1.8×10-9~1×10-11，特別是不易與其他喹諾 酮類抗生素產生交叉耐藥。與第三代喹諾酮類藥物相比， 它進一步提高了對革蘭陽性菌如肺炎球菌的抑制活性， 同時也可以有效抑制厭氧菌。抗非發酵菌（假單胞菌屬 和洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia）除外）、葡 萄球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌和厭氧菌的活性是環丙沙 星和氧氟沙星的 2~16 倍 ；抗大腸埃希菌的活性是環丙沙星的 50%，而抗沙眼衣原體、肺炎衣原體和支原體的活 性都比環丙沙星高。鹽酸莫西沙星開發的制劑包括片 劑，滴眼液，注射液，療效顯著。

于鹽酸莫西沙星自身的抗菌活性，常規檢測方法 未必能真實反映其原料藥中的微生物負載，但藥品微生 物限度是藥品安全性的重要指標之一，法規文件也對此 提出了明確要求。所以，進行微生物限度檢查時，要 求供試品自身在試驗的條件下能有效排除其抑菌作用， 使其不干擾染菌的限度檢驗，檢測方法通過驗證可以確 認供試品所采用的檢查方法和檢驗條件適用。

為消除鹽酸莫西沙星的抑菌活性，準確檢測出每克 原料實際微生物負載量，本研究確認培養基適用性之后， 采用薄膜過濾法，選擇氯化鎂溶液作為中和劑，并以聚 山梨酯 80 作為中和劑同時比較，旨在驗證該方法適用于 鹽酸莫西沙星原料藥中微生物限度的檢測。

實驗所用菌株為即用型定量菌株，金黃色葡萄 球 菌 CMCC(B)26003（批號 20181008）；枯 草 芽 胞 桿 菌 CMCC(B)63501（批號 20180908）；銅 綠 假 單 胞 菌 CMCC(B) 10104（批號 20180809）；白 色 假 絲 酵 母 CMCC(F) 98001（批號 20180904）；黑 曲 霉 CMCC(F) 98003（批號 20180817）。以上菌株均為 3 代，全部購 自浙江泰林生物技術股份有限公司。其凍干粉直接用商 品配套溶液復溶，配制成菌懸液濃度為每 0.1 ml 不超過 100 cfu。 胰酪大豆胨瓊脂培養基（批號 20181025）和沙氏葡 萄糖瓊脂培養基（批號 20170837），均購自浙江泰林生 物技術股份有限公司 ；胰酪大豆胨瓊脂對照培養基（批 號 135025-201603）和沙氏葡萄糖瓊脂對照培養基（批 號 135013-201502），購自中國食品藥品檢定研究院。

鹽酸莫西沙星原料（印度瑞迪實驗制藥股份有限公 司，批號 ABKH005846），氯化鎂（國藥集團化學試劑 有限公司，批號 20181130），pH 7.2 無菌磷酸鹽緩沖液（自 制，批號 20181127）。

BHC-1300IIA2 生物安全柜（蘇州時金凈化設備科 技有限公司）；生化培養箱（上海精宏實驗設備有限公司）； ES-315 全自動滅菌鍋（日本 Tomy 公司）；KBF220 一次 性使用集菌過濾培養器（溫州維科生物實驗設備有限公 司）；XK97-A 菌落計數器（邦西儀器科技（上海）有限 公司）。

按定量菌株要求分別配制好菌懸液，使每 0.1 ml 菌 液濃度不超過 100 cfu ；按照培養基說明書要求，配制好 培養基。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和枯草芽胞 桿菌菌懸液各 0.1 ml，分別各注入 2 個無菌平皿中，立 即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基，混勻，凝固，于 30~35 ℃倒置培養 3 d。白色假絲酵母和黑曲霉同法操作菌，但于 30~35 ℃倒置培養 5 d ；同時，還將他們置于沙氏葡萄 糖瓊脂培養基 20~25 ℃培養 5 d。細菌和真菌均須用相應 的對照培養基替代被檢培養基進行上述試驗。 逐日觀察需氧菌和真菌的菌落生長情況，進行菌落 計數，取平均值計算比值。觀察比較試驗菌在被檢培養 基上與相應的對照培養基上的菌落的數量、形態和大小。

稱量鹽酸莫西沙星原料 10 g，溶于 1 000 ml pH 7.2 無菌磷酸鹽緩沖液，作為 1 ∶ 100 的供試液。 1）試驗組 取供試液 100 ml 與 0.1 ml 的金黃色葡 萄球菌的菌懸液混勻，過濾，用 700 ml pH 7.2 無菌磷酸 鹽緩沖液沖洗，每次 100 ml，沖洗 7 次 ；將濾膜取出， 菌面向上，貼于胰酪大豆胨瓊脂培養基平皿上（平行制 備 2 個平皿），于 30~35 ℃倒置培養不超過 3 d，進行菌 落計數。銅綠假單胞菌和枯草芽胞桿菌同法操作。而白 色假絲酵母和黑曲霉須同法操作各制備 2 張濾膜，分別 貼于胰酪大豆胨瓊脂培養基平皿和沙氏葡萄糖瓊脂培養 基平皿上，置于 30~35 ℃和 20~25 ℃倒置培養不超過 5 d。 2）菌液對照組 取稀釋液 100 ml 代替供試液，加 入 0.1 ml 的菌懸液（不超過 100 cfu），混勻，過濾，按 試驗組同法操作。 3）供試品對照組 取供試液 100 ml，不接入試驗菌， 按照試驗組同法操作。 4）空白對照組 用稀釋液 100 ml 代替供試液，不 接入試驗菌，按照試驗組同法操作。 試驗組菌數回收率 =（試驗組菌落數 - 供試品對照 組菌落數）/ 菌液對照組菌落數 ×100%。 上述試驗獨立平行操作 3 次。

分別以 4.0% 聚山梨酯 80 和 2 mol/L 氯化鎂為中和 劑，各組每 100 ml 培養基中加入了 5 ml 中和劑，其余 按 1.4.2 操作。

被檢與對照培養基菌落平均數的比值均在 0.5 ～ 2 范圍內，且菌落形態大小與對照培養基的菌落一致（表 1），說明培養基適用性檢查符合要求。

2.2 不加中和劑

鹽酸莫西沙星對細菌的抑菌活性較強，檢測需氧菌 總數時需要添加合適的中和劑抑制其自身的抗菌活性 ； 白色假絲酵母和黑曲霉的回收率在 0.5 ～ 2.0 之間（表 2）， 符合藥典規定要求，表明可直接進行霉菌和酵母菌的微生物限度檢測。

3 討論

不同的產品，或者同一產品用途不同，微生物限度的檢測方法都存在差異，需要建立合適的方法。根 據中國藥典 2015 版通則 1105 要求，本研究首先確認 了培養基適用性，然后驗證計數方法適用性，即微生物 限度檢測方法適用性。 鹽酸莫西沙星在水中溶解度不是特別好，選擇 pH 7.2 磷酸鹽緩沖液，可以提高溶解度，并且溶液 pH 穩定。 鹽酸莫西沙星配成 1 ∶ 100 的供試液，取 100 ml，采用 薄膜過濾法，單張薄膜菌落數即可為每克原料的微生物 負載量，無需換算，符合檢測限度要求的量。 鹽酸莫西沙星屬于喹諾酮類藥物，對金黃色葡萄球 菌、銅綠假單胞菌，枯草芽胞桿菌有明顯抑制作用，未 加中和劑或加中和劑聚山梨酯 80 時，這三種細菌的回 收率均為0。