炎癥性腸病( inflammatory bowel disease，IBD) 是一 種累及回腸、直腸、結腸的特發性、慢性和復發性腸道 炎癥性疾病，包括克羅恩病( Crohn’s disease，CD) 和 潰瘍性結腸炎( ulcerative colitis，UC) ，多見于青壯年。 臨床表現為腹瀉、腹痛、血便、體質量減輕等。IBD 過 去多見于西方發達國家，近年來，亞洲地區發病率呈上 升趨勢，流行病學研究顯示我國炎癥性腸病的發病率 高達 3．44%，居亞洲之首。

1 材料與方法

1．1 實驗動物

雄性 C57BL /6J 小鼠 24 只，6 ～ 8 周 齡，體質量( 22±2) g，購自湖北省實驗動物研究中心， 實驗動物生產許可證號: SCXK( 鄂) 2015-0018。飼養 于華中科技大學醫學院附屬同濟醫院動物房，動物飼 養環境溫度為 ( 22±2) ℃，相對濕度為 ( 50±5) %。

1．2 藥物及試劑

茜草藤，2014 年 9 月采于陜西省漢 中地區，經華中科技大學同濟醫學院藥學院張勇慧教授鑒定為茜草的地上部分，標本存放于華中科技大學 同濟醫學院藥學院，編號為: NP2014100703。葡聚糖 硫酸鈉( DSS) 相對分子質量為 35 000 ～ 50 000( 美國 MP 公司，批號: 160110) 。小鼠白細胞介素( IL) -1β、 腫瘤壞死因子-α( TNF-α) 、干擾素-γ( IFN-γ) 酶聯免 疫吸附測定( ELISA) 試劑盒( Elk biotechnology 公司， 批號分別為 ELK1271，ELK1395，ELK1132) 。

1．3 儀器

酶標儀( Diatek 公司，型號: DＲ-200Bs) ，恒 溫培 養 箱 ( 上海精宏實驗設備有限公司，型 號: GNP9160) ，制冰機( 常熟市雪科電器有限公司，型號: IMS-20) 。

1．4 實驗分組

將 24 只 C57BL /6J 小鼠采用體質量 分層隨機數字表法分為空白對照組，模型對照組，茜草 藤大、小劑量組，每組 6 只。

1．5 茜草藤水提物的制備

稱取粉碎后的茜草藤 1000 g，加水至沒過藥材，浸泡 30 min，煎煮 1 h，將水 煎液轉移，再加水至沒過藥材，煎煮 1 h，合并水煎液， 靜置 2 h，依次用脫脂棉、濾紙濾過。將濾過液置旋轉 蒸發儀中減壓濃縮( 溫度 65 ℃ ) ，將濃縮至約1000 mL 的水煎液放置－20 ℃冰箱保存，待用。

1．6 造模方法及藥物干預

茜草藤大、小劑量組分別 預防性灌胃茜草藤提取物 4．8，1．2 g·kg－1 ，預防性給 予 3 d，空白對照組和模型對照組灌胃等體積純化水; 模型對照組和茜草藤大、小劑量組分別給予 3% DSS 溶液造模，自由飲用，連續飲用 7 d，空白對照組小鼠 給予純化水飲用，直到實驗第 10 天。小鼠灌胃藥物， 給藥體積為 20 mL·kg－1 ，每天 1 次，空白對照組小鼠 給予純化水。

1．7 疾病活動度評分

造模前、造模后和給藥后分別 觀察小鼠精神及活動狀況，每天記錄小鼠體質量變 化、大便性狀及便血情況，計算疾病活動指數( disease activity index，DAI) 。體質量變化 ( %) = ( 造模后體 質量－造模前體質量) /造模前體質量×100%。評分如 下，①0 分: 體質量無變化，大便正常，無便血; ②1 分: 體質量變化 1% ～5%，便軟，成型，有便血點; ③2 分: 體 質量變化 5% ～10%，大便有黏液，成型，成塊便血; ④3 分: 體質量變化 10% ～ 15%，便軟，有黏液，成型，成片 的便血; ⑤4 分: 體質量變化 15% ～20%，便軟，有黏液， 不成型，便血及肛門腫脹。

1． 8 樣 本 采 集 實 驗

結 束 后，眼 球 取 血，以3500 r·min－1 離心 10 min，取上層血清、分裝，然后放 置－80 ℃冰箱備用; 剖腹后，摘取小鼠脾臟，測量脾臟 長度及稱定脾臟質量，脾臟指數 = 脾臟總質量( mg) / 小鼠質量( g) ; 剪取距肛門以上 2 cm 結腸，取病變最 明顯處結腸組織于 4%多聚甲醛中，留作病理切片及 免疫組化，再取結腸組織若干移至－80℃冰箱備用。

1．9 蘇木精-伊紅( HE) 染色檢測

按常規包埋、切 片，厚度為 4 μm，進行 HE 染色，高倍顯微鏡下選取視 野，根據潰瘍大小、炎癥浸潤和結構損傷程度等進行結 腸組織病變損傷程度統計和比較，組織學評分標準如 下，①炎癥反應嚴重程度，0 分: 無，1 分: 輕微的，2 分: 中等的，3 分，嚴重的; ②炎性反應范圍，0 分: 無，1 分: 黏膜，2 分: 黏膜和黏膜下層，3 分，透壁的; ③隱窩破壞 程度，0 分: 無，1 分: 1 /3 破壞，2 分: 2 /3 破壞，3 分，隱 窩消失伴上皮細胞出現，4 分: 隱窩及上皮細胞均消失。

2 結果

茜草藤對 DSS 誘導的 UC 小鼠的 體質量影響見圖 1。空白對照組小鼠在實驗期間體質 量均上升，一般狀態良好。小鼠飲用含 3%DSS 飲用水 后，3 組小鼠體質量均不同程度下降。實驗第 7 天，與 正常對照組比較，模型對照組體質量明顯減少( P ＜ 0．01) ，模型對照組在實驗第 7 ～ 10 天體質量均下降， 且第 9 和第 10 天下降最明顯。茜草藤大、小劑量組體 質量均較模型對照組偏高，第 8 天，與模型對照組比較 差異有統計學意義( 均 P＜0．05) 。

茜草藤對 DSS 誘導的 UC 小鼠 DAI 評 分見圖 2。空白對照組小鼠體質量有所增加，大便硬度 適中，黑褐色，橢圓形，無稀便及血便，故其 DAI 評分主 要是其體質量波動評分。模型對照組小鼠飲用 3%DSS4 d 后，大便性狀開始變化，先是成形大便，然后逐漸變 為稀松大便，甚至是水樣瀉，第 5 天部分小鼠出現血便， DAI 評分顯著升高; 茜草藤大、小劑量組小鼠在造模后 也出現體質量降低、大便性狀改變，以及腹瀉、血便等癥 狀，但癥狀明顯比模型對照組輕。與空白對照組比較， 模型對照組小鼠在第 5 天 DAI 評分均顯著升高，差異有 統計學意義( P＜0．01) ，茜草藤大、小劑量組 DAI 評分也 升高，但造模后 DAI 評分均低于模型對照組，第 6 天 DAI 評分顯著低于模型對照組( P＜0．05) 。

3 討論

UC 是目前重點研究的一種慢性疾病，UC 模型的 建立是研究生理病理工作的第一步，目前常用于 UC 基礎藥物研究的造模方法為化學誘導法，其中 DSS 誘 導的模型是最廣泛使用的模型。因此本課題組選 擇 DSS 誘導 UC 模型進行實驗研究，以評價茜草藤水 提物對 UC 的預防作用。